课程代码：
课程中文名称:生物化学实验
课程英文名称：Compact Curriculum of Biochemistry Experiment
课程类别：必修
课程学分数：2
课程学时数：36
授课对象：生物工程专业本科、专科
本课程的前导课程：无机及分析化学、有机化学、生物化学
一、教学目的
通过本课程的学习使学生初步掌握蛋白质的分离纯化及鉴定、酶活性测定、 动力学分析和在代谢过程中的调控作用、核酸有关热变性和酶解测定等知识和技能，通过实验了解糖、脂质和维生素等方面的测定技术,通过综合设计性实验培养学生发现问题和解决问题及创新能力，培养严谨的作风和合作精神。
二、教学要求
1、通过学习滴定、比色、聚丙烯酰胺凝胶电泳、离心等基本实验技术（包括实验方法、操作技术和一些基本仪器的使用等），分析研究糖、脂、蛋白质、核酸、酶等生化物质及某些代谢过程，培养学生具有初步的科学实验能力及严谨的科学作风，同时验证生物化学的某些
基本理论知识，加深感性认识。
2、掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术，训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器。
3、学会准确详实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力。培养严谨细致的科学作风和团结互助的合作精神，鼓励学有余力的学生自行设计实验或参与实验教改，思想活跃，积极与老师交流意见，鼓励学生勇于创新。
4、将利用多媒体教学手段讲解实验的基本原理、方法及有关仪器的使用方法。
三、课程教学内容与要求
实验一、可溶性糖含量的测定――蒽酮法
【目的和要求】
1. 了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法；
2. 学习求标准曲线方程----最小二乘法；
3. 掌握分光光度计的使用
【实验内容】
1. 学习求标准曲线方程----最小二乘法；
2．掌握蒽酮法对样品中糖的含量进行测定，得到准确的多糖含量,本方法具有简单、易掌握、快速等优点,对生产上检测多糖含量具有实用价值；
3. 掌握分光光度计的使用
【重难点】
1. 蒽酮法测糖的操作及注意事项（安全），分光光度技术的标准曲线法。
【注意事项】
1. 该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑尘埃；
2. 硫酸要用高纯度的；
3. 不同糖类与蒽酮的差异、稳定性也不同，加热、比色时间应严格掌握。
实验二、蛋白质含量的测定
【目的和要求】
1. 了解folin-酚法和考马斯亮蓝的基本原理和干扰因素；
2. 掌握标准曲线法测定蛋白质含量的基本操作；
3. 掌握721分光光度计的使用方法。
【实验内容】
1.采用Folin－酚法测定蛋白质含量；
2. 采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量；
3. 分光光度法制作标准曲线。
【重难点】
蛋白质含量测定的操作技术，可见分光光度计使用（标准比较法和回归方程法）
【注意事项】
1. 蛋白质样品和显色剂都不应有沉淀，否则应过滤去除；
2. 染料与蛋白质结合后，形成的蓝色复合物易轻度粘附于试管壁或比色皿，每次使用不能用有着色的比色皿，使用完后应立即清洗干净。
实验三、粗脂肪的定量测定――索氏（Soxhlet）提取法
【目的和要求】
1、熟悉掌握粗脂肪提取的原理和测定方法。
2、熟悉与掌握重量分析的基本操作，包括样品处理，烘干，恒重等。
【实验内容】
1. 去除样品中的水分；
2. 索氏（Soxhlet）提取器的连接；
3. 粗脂肪的提取；
4. 重量分析的基本操作，包括样品处理，烘干，恒重等。
【重难点】
1. 样品中总糖和多糖的测定原理、测定方法及注意事项。
2. 各种糖测定时的样品处理、测定的注意事项。
【注意事项】
1. 样品应干燥后研细，装样品的滤纸筒一定要紧密，不能往外漏样品，否则重做。
2. 放入滤纸筒的高度不能超过回流弯管，否则乙醚不易穿透样品，脂肪不能全部提出，造成误差。
3. 碰到含多量糖及糊精的样品，要先以冷水处理，等其干燥后联通滤纸一起放入提取器内。
4. 提取时水浴温度不能过高，一般使石油醚刚开始沸腾即可。回流速度以每8-12次／时为宜。
5. 将提取瓶放在烘箱内干燥时，瓶口向一侧倾斜45℃放置使挥发物乙醚易与空气形成对流，这样干燥迅速。
6. 样品及醚提出物在烘箱内烘干时间不要过长，因为一些很不饱和的脂肪酸，容易在加热过程中被氧化成不溶于乙醚的物质；中等不饱和脂肪酸，受热容易被氧化而增加重量．在没有真空干燥箱的条件下，可以在100-105℃干燥1.5-3小时。
7. 使用挥发乙醚或石油醚时，切忌用直接火加热。应用电热套电水浴，电灯等．
8. 刮下样品时要小心操作，防止混入杂质
实验四、聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳（PAGE）分离血清蛋白
【目的和要求】
1. 掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理；
2. 学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术；
3. 学会利用相对迁移率和蛋白质色带形状分析蛋白质种类。
【实验内容】
1. 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术。
2. 利用相对迁移率和蛋白质色带形状分析蛋白质种类。
【重难点】
1. 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离物质的基本原理：凝胶的聚合、电泳分离过程中的三种效应；2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用，操作与装置。
【注意事项】
1. 灌胶时应注意排除气泡；
2. 加样时、剥胶时注意注射器针头切勿损坏胶条，否则无法得到正确的结果；
3. 电泳前注意正负电极的连接，切记排出管下端的气泡。
实验五、动物组织核糖核酸的制备及测定
【目的和要求】
1. 学习和掌握用苯酚法及盐溶液法从动物组织中提取RNA的原理及操作技术；
2. 掌握正确的提取DNA的方法，并了解提纯过程中不同试剂的作用
【实验内容】
1.取活体肝脏，并破碎；
2.提纯RNA；
3.用紫外分光光度计检测所提RNA。
【重难点】
1. RNA提取和鉴定方法，
2. 普通离心机的使用及注意事项，
【注意事项】
1． 核酸是一类极其不稳定的生物高分子，尤其在制备过程中，若不注意核酸的生物学特性，往往会容易发生降解现象，因此，要使制得的核酸尽可能保持其生物体内的天然状态。在提取制备操作时，必须严格采取温和地条件。例如避免过酸过碱，避免剧烈的搅拌和切割、低温以及防止核酸降解酶类的作用。
3. 苯酚有毒，对皮肤有腐蚀作用，切勿乱取乱弃，若不慎溅到皮肤上，立即用75%乙醇擦洗。
实验六、脲酶Km值的简易测定
【目的和要求】
脲酶是氮素循环的一种关键性酶，它催化尿素与水作用生成碳酸铵，在促进土壤和植物体内尿素的利用上起有重要作用。对其进行多方面研究，早已引起人们重视。
1. 通过本实验，学习脲酶Km值的测定方法；
2. 掌握一般的数据处理方法。
【实验内容】
1. 脲酶的提取；
2. 标准曲线的制作；
3. 酶促反应速度的测定；
4. 计算Km值
【重难点】
1. 酶促反应速度的测定；
2. 计算Km值
【注意事项】
（1）准确控制各管酶反应时间尽量一致。
（2）按表中顺序加入各种试剂。
（3）奈氏试剂腐蚀性强，勿洒在试管架和实验台面上
四、课程内容重点及学时分配
五、教材与参考书
教 材：《生物化学实验讲义》，自编，吴士筠等，2006.9.
六、主要参考资料
1．《生物化学仪器分析与实验技术》 化学工业出版社 周先碗 胡晓倩
2．《生物化学实验方法和技术》 科学出版社 陈毓荃
3.《生化实验方法和技术》（第二版），高等教育出版社，张龙翔、张庭芳、李令媛主编，1997.79.
4.《生物化学与分子生物学实验指导》，武汉大学版社，邵学玲、毛歆、郭一清主编，2003.10.
七、考核方式
本课程的实验考核采取平时实验操作与平时预习报告、实验报告完成情况相结合方式，按百分制综合评定成绩。实验操作成绩占70%，实验报告完成情况20%，预习报告10%。
（撰写人：吴士筠，审核人： 吴士筠 ，批准人： ）