课程代码编号：
课程中文名称: 《环境工程微生物》
课程英文名称：Environmental Engineering Microbiology
课程类型：专业课实验
课程对象类别：环境工程本专科/必修
课程学分数：2学分
课程学时数：32学时
前导课程：环境学、环境生态学。
一、实验课程教学目的
训练学生掌握环境微生物学最基本的操作技能；了解环境微生物学的基本知识；加深和巩固理论课内容的理解。另一方面，通过实验不仅培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力。同时也培养学生的实践能力和创新意识，掌握细菌的染色方法、微生物的无菌操作和观察微生物的形态特征，学会微生物的大小测定、数量的测定和微生物的纯种分离培养、水中细菌总数的检测、水中大肠菌群的检测。
二、实验课程教学要求
在实验过程中，要求学生深化理论知识，做到理论联系实际，加强学生的动手操作能力，做到手到心到，为今后走向工作岗位打下坚实基础。同时对实验目的、实验原理、实验仪器设备、实验步骤、实验现象的观察与记录、实验数据和处理、结果等问题作出讨论与分析，写出规范的实验报告。
三、实验课程教学内容与要求
实验一. 光学显微镜操作（细菌、放线菌形态观察）
【目的和要求】
1. 掌握光学显微镜的结构、原理；正确使用显微镜；
2. 学会使用显微镜进行微生物个体形态的观察，学会生物图的绘制。
【实验内容】
1了解显微镜的结构，熟练使用显微镜。
2. 观察细菌，蓝细菌个体形态。
【重难点】
光学显微镜的结构、原理；使用显微镜的使用。
【注意事项】
1. 搬动显微镜时，要一手握镜臂，一手扶镜座，两上臂紧靠胸壁。切勿一手斜提，前后摆动，以防镜头或其他零件跌落。
2．使用时要严格按步骤操作，熟悉显微镜各部件性能，掌握粗、细调节钮的转动方向与镜筒升降关系。转动粗调节钮向下时，眼睛必须注视物镜头。
实验二. 显微镜测微尺操作及原生动物、藻类个体形态观察
【目的和要求】
1. 了解测微尺的原理和构造。
2. 掌握微生物细胞大小的测定方法。
【实验内容】
1学习测微尺构造和使用方法，
2测算原生动物和藻类菌体大小。
【重难点】
1. 微生物细胞大小的测定。
【注意事项】
1．观察标本时，显微镜离实验台边缘应保持一定距离(
实验三. 微生物细胞计数及染色操作
【目的和要求】
了解血球计数板的结构，掌握其使用和计算方法。学习革兰氏染色的原理和步骤；进一步认识细菌的形态，巩固显微镜（特别是油镜的使用）使用方法和无菌操作技术。
【实验内容】
1. 学习细胞血球计数（酵母菌液），
2. 学习微生物涂片、染色的基本技术，
3. 掌握细菌的简单染色方法。
【重难点】
血球计数板的使用和计算方法，革兰氏染色的原理和步骤。
【注意事项】
1、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母凝聚沉淀。
2、活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。
3、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。
实验四 . 培养基的制备和灭菌
【目的和要求】
1. 掌握玻璃器皿的洗涤和包装；
2.了解培养基的配制及消毒灭菌的原理；
3.掌握培养基的配制及消毒灭菌的方法和步骤。
【实验内容】
1. 配制培养基。
2. 消毒灭菌。
3. 斜面接种。
【重难点】
培养基的配制；培养基的配制及分装。
【注意事项】
1.冷空气彻底排除；
2.注意高压灭菌锅压力应稳定在
3.要严格按配方配制。
4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
实验五. 细菌纯种分离培养和接种技术
【目的和要求】
1.学会平板画线纯化的方法及观察菌落形态。
2.掌握无菌操作技术。
3.掌握菌落形态的观察。
【实验内容】
1.稀释平板分离法。
2.平板划线分离法。
3.菌落形态观察。
【重难点】
平板画线纯化的方法，无菌操作技术。
【注意事项】
1. 划线接种时，角度、力量要掌握好，不可划破平板表面；
2. 划线时要密而不重复，充分利用平板表面；严格无菌操作。
3. 要在无菌环境下操作。
实验六. 粪大肠杆菌的测定（滤膜法）
【目的和要求】
1. 学习掌握测试污水中的大肠杆菌数。
2. 了解测定过程中每一步的基本原理。
【实验内容】
1. 滤膜和滤器的灭菌。
2. 水样过滤。
3. 滤膜的培养。
【重难点】
水样过滤，滤膜上微生物的培养。
【注意事项】
1. 要保证水样在采集、运输、保存过程中不受污染。
2. 实验过程中所 用的玻璃仪器均要灭菌。
3. 检验开始前要充分摇匀混合水样，这样可以确保细菌在水样中均匀分布，以保证湖水大肠杆菌数量的准确性。
实验七 . 空气微生物的检测
【目的和要求】
1. 了解环境中微生物的分布状况；；
2. 学习并掌握鉴定和计数空气微生物的基本方法。
【实验内容】
采用过滤法测定空气中的细菌。
【重难点】
空气微生物的基本计数方法；鉴定空气中细菌菌落。
【注意事项】
1.所用实验器具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
实验八. 富营养化水体中藻类的测定（叶绿素a法）
【目的和要求】
掌握叶绿素a的测定原理及方法。
【实验内容】
测定水体中的叶绿素a含量，评价水体富营养化状况
【重难点】
叶绿素a的提取及其浓度计算。
【注意事项】
1.整个实验中所用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，避免酸性条将引起叶绿素a分解。
四、实验学时分配
| 序号 | 内容 | 重点 | 学时 |
| 1 | 显微镜的使用与细胞形态的观察 | √ | 4 |
| 2 | 显微镜测微尺操作及原生动物、藻类个体形态观察 | √ | 4 |
| 3 | 微生物细胞计数及染色操作 | √ | 4 |
| 4 | 培养基的制备和灭菌 | √ | 4 |
| 5 | 细菌纯种分离培养和接种技术 | | 4 |
| 6 | 粪大肠杆菌的测定（滤膜法） | | 4 |
| 7 | 空气微生物的检测 | | 4 |
| 8 | 富营养化水体中藻类的测定（叶绿素a法） | | 4 |
五．实验教材及参考书
教 材：《环境工程微生物学》（第二版）,高等教育出版社。周群英、高廷耀等著。
参考书：[1]《工业微生物学实验技术》，天津科技出版社，杜连祥编著，1992年。
[2]《微生物学实验》，化学工业出版，杨文博主编，2004年。
[3]《微生物教程》， 高等教育出版社，周德庆编著，1994年。
六. 实验考核
操作成绩占总成绩的20%，实验报告平均成绩占总成绩70%，课堂提问占5%，课堂出勤成绩占总成绩5%
（撰写人：刘红丽，审核人：刘鲁建 ，批准人： ）